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马铃薯毒素检测——分光光度法

  • 发布日期:2016/9/24 13:44:29 阅读次数:1308
  • 1.仪器

    分光光度计。

    2.试剂

    6)95%乙醇

    ②浓H2SO4、5%H2SO4、1%H2SO4。

    ③NH3H2O液。

    ④l%甲醛液。

    ⑤冰乙酸

    ⑥马铃薯毒素标准液(1mg·mL):称取马铃薯毒素标准品0.1000g于1.0mL容量瓶中,用1%H2SO4溶解并定容至刻度。

    3.检测步骤

    取50g样品于索氏提取瓶中,加100mL乙醇、3mL冰乙酸,在水浴上回流16h,回收乙醇,待溶液剩10mL左右,转入蒸发皿中,蒸去乙醇至近干,加20mL5%H2SO4溶解,过滤于锥形瓶中,用NH3·H2O调pH为10,置80℃水浴,加热5rnin,析出沉淀,置冰箱中过夜,离心,倾去上清液,用1%氨水洗至无色,残渣用1%H2SO4溶解并定容至2mL,置冰浴中滴加浓H2SO45mL,lmin后滴加1%甲醛2.5mL,90min后,用1%H2SO4定容至10mL,用1cm比色皿,空白管调零,于波长520nm处测吸光度(同时做空白试验)。

    4.标准曲线制备

    吸取马铃薯毒素标准液(1mg·mL-1)0.0mL、0.1mL、0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL于10mL比色管中,加1%H2SO4至2mL,置冰浴中滴加浓H2SO45mL,1min后加1%甲醛2.5mL,90min后,用1%H2SO4定容至刻度,用1cm比色皿,零管调零,于波长520nm处分别测吸光度,绘制标准曲线。

    5.计算

    X=(CS*1000)/[m*(V1/V2)*1000]

    式中:X——马铃薯中马铃薯毒素含量,mg·k-1;

    Cs——样液吸光度查标准曲线对应含量,µg;

    V1——检测体积,mL;

    V2——样液定容体积,mL;

    m——样品质量,g。

    6.说明

    ①样品以制成匀浆液为宜。

    ②在冰浴上滴加浓H2SO4时,宜控制在3min以上滴完;滴加2.5mL1%甲醛宜在2.5min以上滴完,不应过快,否则会发生碳化现象,影响比色。

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