1.仪器
分光光度计。
2.试剂
6)95%乙醇。
②浓H2SO4、5%H2SO4、1%H2SO4。
③NH3H2O液。
④l%甲醛液。
⑤冰乙酸。
⑥马铃薯毒素标准液(1mg·mL):称取马铃薯毒素标准品0.1000g于1.0mL容量瓶中,用1%H2SO4溶解并定容至刻度。
3.检测步骤
取50g样品于索氏提取瓶中,加100mL乙醇、3mL冰乙酸,在水浴上回流16h,回收乙醇,待溶液剩10mL左右,转入蒸发皿中,蒸去乙醇至近干,加20mL5%H2SO4溶解,过滤于锥形瓶中,用NH3·H2O调pH为10,置80℃水浴,加热5rnin,析出沉淀,置冰箱中过夜,离心,倾去上清液,用1%氨水洗至无色,残渣用1%H2SO4溶解并定容至2mL,置冰浴中滴加浓H2SO45mL,lmin后滴加1%甲醛2.5mL,90min后,用1%H2SO4定容至10mL,用1cm比色皿,空白管调零,于波长520nm处测吸光度(同时做空白试验)。
4.标准曲线制备
吸取马铃薯毒素标准液(1mg·mL-1)0.0mL、0.1mL、0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL于10mL比色管中,加1%H2SO4至2mL,置冰浴中滴加浓H2SO45mL,1min后加1%甲醛2.5mL,90min后,用1%H2SO4定容至刻度,用1cm比色皿,零管调零,于波长520nm处分别测吸光度,绘制标准曲线。
5.计算
X=(CS*1000)/[m*(V1/V2)*1000]
式中:X——马铃薯中马铃薯毒素含量,mg·k-1;
Cs——样液吸光度查标准曲线对应含量,µg;
V1——检测体积,mL;
V2——样液定容体积,mL;
m——样品质量,g。
6.说明
①样品以制成匀浆液为宜。
②在冰浴上滴加浓H2SO4时,宜控制在3min以上滴完;滴加2.5mL1%甲醛宜在2.5min以上滴完,不应过快,否则会发生碳化现象,影响比色。