山梨酸(己二烯-(2,4)-酸)作为防腐剂,毒性较苯甲酸低。ADI为0~25mg.kg-1。山梨酸微溶于冷水,易溶于乙醇和乙醚,沸点228℃。山梨酸由水蒸气蒸馏可与杂质分开,而得澄清的山梨酸馏液,在紫外光区有最大吸收峰。目前,测定山梨酸有比色法、紫外光分光光度法、气相色谱法、液相色谱法等。
氧化-比色法
自样品提取出山梨酸或其盐类,此山梨酸在硫酸和重铬酸钾的氧化作用下产生丙二醛。丙二醛和硫代巴比妥酸作用产生红色化合物,其红色深浅与丙二醛浓度成正比,符合比尔定律,故司比色测定。
1.主要仪器
分光光度计。
2.试剂
①硫代巴比妥酸溶液:准确称取0.5g硫代巴比妥酸于100mL容量瓶中,加人20mL蒸馏水,然后再加入10mL1mol·L-1氢氧化钠溶液,充分摇匀。使之完全溶解后再加人11mLlmol·L-1盐酸,用水稀释至刻度。此溶液要在使用时新配制,最好在配制后不超过6h肉便用。
②重铬酸钾一硫酸混合液:以0.05mol·L-1重铬酸钾和0.15mol·L-1硫酸以1:1比例混合均匀配制备用。
③山梨酸钾标准溶液:准确称取250mg山梨酸钾,用溶解转入250mL容量瓶中黧要车刻度,摇匀,即为山梨酸钾标准溶液(1mg·mL-1)。准确移取25mL上述山梨酸钾标准溶液于250mL容量瓶中,稀释至刻度,充分摇匀(100µg.mL—1)。
3.操作步骤
①山梨酸钾标准曲线的绘制:取250mL容量瓶五个,分别加入0.0l%山梨酸钾0、2.5、5.0、6.25、7.5mL,以水定容。分别用移液管吸取2mL置于五个小试管中,再加入2mL重铬酸钾一硫酸混合溶液,在100℃水浴锅内加热7min后,立即用移液管各加入2mL硫代巴比妥酸溶液,继续加热l0min,立即取出迅速用冷水冷却,在分光光度计上以波长530nm进行比色测定,绘制标准曲线。
②样品中山梨酸的测定:样品匀浆(样品:水=l:9)的制备:准确称取150g样品,加蒸馏水210mL。继续搅拌1min,即得所要的匀浆。准确称取样品匀浆10g定量转人250mL容量瓶内,以水稀释至刻度,摇匀,过滤。吸取滤液2mL于小试管内,再加入2mL重铬酸钾-硫酸混合液,在100℃水浴锅内加热7min,然后立即用移液管加入2mL硫代巴比妥酸溶液,继续加热10min,立刻取出,迅速用冷水冲冷,在分光光度计上以530nm测吸光度。从标准曲线上查得样品中山梨酸的量。
4.计算
样品中山梨酸的含量(µg·g)=在标准曲线上查得山梨酸钾的含量×稀释倍数×﹙112.1/150.2﹚样品重﹙g﹚