纯净的苯甲酸钠在225nm处有最大吸收峰,它的吸光度与浓度的关系符合比尔定律。
1.主要仪器
紫外光分光光度计。
2.主要试剂
①酚酞溶液:取1酚酞溶于100mL95%乙醇中。
②85%正磷酸。
③重铬酸钾(0.2mol·L-1):溶解4.9g重铬酸钾于水中,稀释至500mL。
④硫酸(2mol·L-1):稀释66.5mL浓硫酸至500mL。
⑤苯甲酸钠贮备液(100mg/L):称量经过干燥的苯甲酸钠100mg(105℃干燥2h),加100mL0.lmol·L-1氢氧化钠及适量的水溶解,定量转于1000mL容量瓶中,以水定容至刻度,摇匀。
⑥苯甲酸钠工作液(20mg/L):稀释20mL贮备液至100mL。
3.标准曲线的绘制
移取苯甲酸钠工作液0、l、2、3、4、5mL于6个10mL容量瓶中,各加人lmL0.1mol·L-1氢氧化钠溶液并用水定容,在225nm处测定吸光度。以吸光度对浓度制成标准曲线。
4.样液中苯甲酸钠的测定
①样液的制备:准确称量5g左右果汁于100mL容量瓶中,加50mL水,以酚酞为指示剂,以0.1mol·L-1氢氧化钠溶液调整至呈粉红色,再以水定容。
②空白液的制备:移取20mL上述中型样液(应含苯甲酸钠在200~1000µg,否则增减所取的mL数)于250mL蒸馏瓶中,加20g无水硫酸钠及30mL水,连接蒸馏设备(以50mL容量瓶、内置5mL0.1mol·L-1氢氧化钠溶液为吸收瓶)。以大火加热,调节火力,使馏液为10mL时所需的时间约为10min。收集馏液35mL后停止蒸馏,以水洗净冷凝管,然后以水定容此接收瓶。
③比色液的制备:方法与空白液制备相同,只是在加20g无水硫酸钠以前,要加1mL正磷酸。
④样液的比色:以空白液为对照,于225nm处测定吸光度,从标准曲线可得苯甲酸钠的浓度。
5.计算
苯甲燃(g·kg-1)=[X*(V/V/)/m]*1000
式中:m——样品质量,g;
V——萃取mg样品所得到的溶液体积,mL;
V/——比色用的溶液体积,mL;
X——V/毫升中含苯甲酸钠的重量,g(从标准曲线查得)。
6.说明
用乙醚提取时,不要上下振荡以免生成乳状液,不易分离,应旋转分液漏斗进行提取。如形成乳浊液,可用一玻棒搅拌,或对乳状液进行一、二次上下的激烈振荡,或用离心机分离;提取液被吹干后,最好放置过夜,以排除可能存在的醋酸的干扰,否则结果偏高。