尿素为非电解晶体物质,在水溶液中不发生电离,当掺人牛乳后使相对密度调为正常,以掩盖掺水。
1.快速试纸检测法
①试剂:对二甲氨基苯甲醛液(取对二甲氨基苯甲醛液1g,加95%乙醇50mL,混匀,加浓HCL5mL溶解,贮于棕色瓶中)。,
②快速试纸制备:将定性滤纸裁成5cm×1cm,浸泡于对二甲基苯甲醛液5min,取出晾干。
③检测:取乳样4滴于白瓷皿中,将快速试纸浸于白瓷皿乳液中,当试纸由无色变为黄色,疑掺有化肥或尿素,正常乳不变色(同时做正常乳实验)。
④说明
a.试纸法适用于现场收购鲜乳使用,最低检测限0.25%。
b.试纸应在使用前临时浸入试剂制成。
c.对二甲氨基苯甲醛试剂置阴凉处避光保存,可长期使用。
2.格里斯试剂法
①试剂
a.浓H2SO4。
b.1%NaNO2液。
c.格里斯(Griess)试剂:取酒石酸89g、对氨基苯磺酸10g、α—萘胺1g混合研成粉末,贮于棕色瓶中。
②检测:取乳样(5mL)于试管中,加1%NaNO2液及浓H2SO4各1mL,混匀,5min后,加Griess试剂0.5g,混匀,观察,呈黄色为掺有尿素;紫色为正常乳(同时做正常乳实验)。
3.丁二酮肟分光光度法
①试剂
a.乙醇。
b.丁二酮肟液:取丁二酮肟0.3g,加HCl10mL,临用时配制。
c.0.2%氨基硫脲液。
d.尿素标准贮存液,0.1mg·mL-1。
e.尿素标准应用液,10µg·mL-1。
②仪器:分光光度计。
③标准曲线制备:分别吸取尿素标准应用液(10µg·mL-1)0.0mL、0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL于试管中,加水4mL、0.2%氨基硫脲液0.2mL,摇匀,加丁二酮肟液0.8mL,摇匀,显色液于沸水浴加热12min,冷却,水定容至l0mL。用1cm比色皿,在分光光度计,波长520nm测吸光度,绘制标准曲线。
④检测:取乳样10mL于锥形瓶中,加乙醇50mL,振荡30min,静置,定容至100mL,上清液过滤,取滤液1mL于试管中,加水4mL、0.2%氨基硫脲液0.2mL,摇匀,加丁二酮肟液0.8mL,摇匀,显色液于沸水浴加热12min,冷却,水定容至10mL。用
从标准曲线即可得尿素的含量。
⑤计算
X=(CS*V2)/(V1*V)
式中:X——乳中尿素含量,µg·mL-1;
CS——从标准曲线上查得样液中尿素含量,µg;
V1——样液检测体积,mL;
V2——样品提取液总体积,mL;
V——样品体积,mL。