维生素B2又名核黄素,由异咯嗪加核糖醇侧链组成,并有许多同系物。在自然界中主要以磷酸酯的形式存在于黄素单核苷酸(FMN)和(FAD)两种辅酶中。纯净的维生素B2为橘黄色晶体,味苦,微溶于水。在中性和酸性溶液中稳定,但在碱性环境中受热易分解。游离的维生素B2对光敏感,特别是在紫外线照射下可发生不可逆的降解而失去生物活性。食物中的维生素B2一般为与磷酸和蛋白质结合的复合化合物,对光比较稳定。
维生素B2广泛存在于动植物食物中,但由于来源和收获、加工储存方法的不同,不同食物中维生素B2的含量差异较大。乳类、蛋类、各种肉类、动物内脏中维生素B2的含量丰富;绿色蔬菜、豆类中含量中等;粮谷类的维生素B2主要分布在谷皮和胚芽中,碾磨加工会丢失一部分维生素B2,故植物性食物中维生素B2的量一般都不高。
测定维生素B2的方法有荧光分光光度法、高效液相色谱法、微生物法等。其中荧光法操作简单、灵敏度高,是应用最普遍的方法。这里介绍硅镁吸附剂净化荧光法。
维生素B2在440一500nm波长光照射下发生黄绿色荧光。在稀溶液中其荧光强度与维生素B2的浓度成正比。利用硅镁吸附剂对维生素B2的吸附作用除去样品中的干扰荧光测定的杂质,然后洗脱维生素B2,测定其荧光强度。试液再加入低亚硫酸钠(Na2S2O4),将维生素B2还原为无荧光物质,再测定试液中残余杂质的荧光强度,两者之差即为食品中维生素B2所产生的荧光强度。
样品中维生素B2含量根据下列公式计算:
X=(U-Ub)×[(ρ×V)/(S-Sb)×(V1/V2)×(1/m)×(100/1000)]
式中:X—样品中维生素B2含量,mg/l00g;
U—样品管荧光值;
Ub一样品管空白荧光值;
S—标准管荧光值;
Sb—标准管空白荧光值;
ρ—维生素B2标准使用液浓度,μg/mL;
V—于氧化去杂质操作的维生素B2标准使用液体积,mL;
V1—用于氧化去杂质操作的试样提取液体积,mL;
V2—样品水解酶解后定容总体积,mL;
m—样品的质量,g;
100/1000一样品含量由μg/g换算成mg/l00g的系数。
说明及注意事项如下。
(1)本法适用于粮食、蔬菜、调料、饮料等脂肪含量少的样品,脂肪含量过高及含有较多不易除去色素的样品不适用。
(2)维生素B2对光敏感,整个操作应尽可能在暗室中进行。
(3)氧化去杂质,加入高锰酸钾的量不易过多,以避免加入双氧水的量大,产生气泡,影响维生素B2的吸附及洗脱。
(4)维生素B2可被低亚硫酸钠还原成无荧光型;但摇动后很快就被空气氧化成有荧光物质,所以要立即测定。