【实验器材】
(1)仪器电子天平、高压蒸汽灭菌锅、pH计、烧杯、磁力搅拌器、容量瓶、盐水瓶、灭菌过滤器、移液器及配套枪头等。
(2)材料滤纸、称量纸、滤膜。
(3)试剂 NaOH、NaHCO3、羟乙基哌嗪乙硫磺酸(HEPES)、新鲜制备的三蒸水等。
【操作方法与步骤】
(一)NaHCO3的配制
(1)准确称取所需NaHCO3(常用浓度为3．7％、5.6 %或7．4％)，用一定量新鲜制备的三蒸水溶解。
(2)用三蒸水定容至所需体积，用0．22μm微孔滤膜滤过除菌。
(3)分装于安瓿瓶中，于4℃冰箱保存备用。
(二)0．5 mol／L HEPES配制
(1)准确称取HEPES 119．15 g，用一定量新鲜制备的三蒸水溶解。
(2)用三蒸水定容至500 mL，用1 mol／L NaOH调其pH至7．5，再用0．22μm微孔滤膜滤过除菌。
(3)分装小瓶，于常温或4℃冰箱保存备用。
(三)配制pH调整液注意事项
(1)NaHCO3每次用一支，并一次用完。
(2)使用NaHCO3要逐滴加入，并不时搅拌，防止局部pH过高。
(3)HEPES使用终浓度为10～50 mmol／L，一般培养液内含20 mmol/L HEPES即可达到缓冲能力。
(4)因为现在市售HEPES为约10 g包装的小瓶，所以可根据实际情况灵活配制，但是要保证培养液内HEPES的终浓度仍然为20 mmol／L。如称取4．766 g HEPES溶于20 mL三蒸水中，过滤除菌后可完全(20 mL)加入1 L培养液中，或者每100 mL培养液中加入2 mL即可。
