l.原理
同纸层析法，只是将纸层析换成中性氧化铝柱层析。
2．仪器
色谱柱：1．Ocm×25cm的玻璃柱，底端收缩变细，并有一活塞，用于调空液体流速；距底端上1cm处有一筛板，孔径为16～30?m。用前需干燥。
其余仪器同纸层析法。
3．试剂
①中性氧化铝：80~100目。用前于180℃烘干4 h至恒重。
②其余试剂同纸层析法。
4．操作步骤
①样品提取、洗涤等步骤同纸层析法。
②将洗涤后提取液浓缩并定容至10mL。
③柱色谱：将已干燥的中性氧化铝浸泡在石油醚中，以湿法填充色谱柱至高度为15cm，其上端加2cm高的无水Na2SO4，使石油醚自由流下，保证其水平高于Na2S04平面0．5cm(注意：色谱柱填充时应避免水分，不要有气泡进入)。将样品提取液加入色谱柱上，自由流下，待提取液体流至柱面时，分次加入石油醚2mL，洗涤柱壁，再加人石油醚洗脱，收集流出液至黄色带全部流出。流出液经60℃水浴减压蒸馏后，N2吹干，定容。
④比色测定同纸层析法。
5．说明
①柱色谱法的优点是在测定胡萝卜素的同时可测定其他类胡萝卜素和色素。类胡萝卜素、色素和胡萝卜素的极性不同，胡萝卜极性最小先被极性小的石油醚洗脱，增加洗脱液极性(如加入乙醚、丙酮)，可先后将极性稍大的类胡萝卜素(如叶黄素、叶红素)、叶绿素洗脱。
②纸层析法和柱色谱法都不能区分α-，β-和γ-胡萝卜素，虽然标准品是β-胡萝卜素，但实际结果为总胡萝卜素。不过天然食品中大部分为β-胡萝卜素，对结果影响不大。两种方法结果相当。
