本方法通过采用不同于国标GB/T5009.192-2003第二法的流动相和样品前处理技术检测动物性食品中盐酸克伦特罗(瘦肉精)，获得了高于国标的检出限和收回率。同时避免了复杂的样品前处理，有效提高了检样结果准确度。
一、材料和方法
1.试剂
甲醇(色谱纯)、超纯水、硫酸铵(分析纯)、乙腈、亚铁氰化钾(106g/L)、乙酸锌(220g/L)。
2.仪器
SHIMADZU岛津SPD-M20A高效液相色谱仪(日本岛津公司)、LCsolution工作站；超声波清洗器、离心机。
(1)色谱柱:Dlamonsil C18(2)5μ 250×4.6mm
(2)最佳色谱条件
①流动相:0.02mol/L硫酸铵(700mL)+甲醇(250mL)+乙腈(50mL)
②柱温:40℃
③波长:210nm
④流速:1.0mL/min
⑤进样量:10μL
3.试验方法
称取动物性食品试样5g(精确到0.001g)，用20mL 0.02mol/L硫酸铵溶液匀浆，置于50mL离心管中，分别加入2mL亚铁氰化钾和乙酸锌溶液，再加入5mL色谱甲醇溶液，然后置于超声波清洗器中超声15min，用流动相定容，再离心(5000r/min)10min，取上清液经筒式微孔滤膜过滤进行LC分析。
二、方法验证
1.检出限与定量限
在上述测定条件下，将样品不断稀释，直到目标化合物的峰高与基线噪音之比为2或3，连续进样9针，根据每次的积分峰面积，外标法计算其对应的浓度，结果如表1所示。同时计算出这几次进样的相对标准偏差，最低检出限=平均值+3×相对标准偏差。基线噪音峰高:0.022；以信噪比S/N=3计，盐酸克伦特罗检出限为0.5991ng，盐酸克伦特罗定量下限为检出限×3=1.8ng。
<CTSM>表1盐酸克伦特罗检出限的检测结果</CTSM>
2.线性范围
分别配制1ng、10ng、100ng、200ng、300ng、1000ng的盐酸克伦特罗标准溶液，按上述色谱方法进行测定，含量与峰面积结果如表2所示。检测图谱如图1所示，标准曲线如图2所示。以色谱峰面积为纵坐标、盐酸克伦特罗含量为横坐标作线性回归分析，盐酸克伦特罗的线性方程为Y=0.000153155X+0.197399，相关系数R=0.9999524，在(1～1000)ng范围内呈良好的线性关系。
<CTSM>表2标准溶液含量与峰面积</CTSM>
<CTSM>图1盐酸克伦特罗检测图谱</CTSM>
<CTSM>图2标准溶液标准曲线</CTSM>
3.回收率
取动物性食品9份，每份添加50ng/mL盐酸克伦特罗标准物质1mL，按照上述条件测定，样品中盐酸克伦特罗平均含量为36.03ng/mL，结果如表3所示。回收率在92%～98%之间。
<CTSM>表3回收率实验数据单位:ng/kg</CTSM>
三、小结
通过采用不同于GB/T5009.192-2003第二法的流动相和样品前处理方法，获得盐酸克伦特罗定量检测下限为0.18μg/kg，比国标方法检出限低64%，在目标组分为(1～1000)ng之间，盐酸克伦特罗的线性回归方程为Y=0.000153155X+0.197399，相关系数R=0.9999524，呈良好的线性关系。实验结果表明，加标50ng，平均回收率为94.8%，回收率范围在92%～98%之间。该方法简便、快速、准确、节省化验成本，适合各实验室动物性食品中盐酸克伦特罗的测定。
