生物指示剂出现假阳性的原因分析及防范
胡秀凤,张莉莉,杨 洁,周新凤
(江苏省镇江市第三人民医院,江苏镇江, 212000)
关键词:生物指示剂;假阳性;电热恒温水温箱;试管裂痕
2007年2月,镇江市第三人民医院供应室新 添置了一台脉动真空矩型压力蒸汽灭菌器,在起 用前进行试运行监测,每次均进行工艺监测、化学 监测和生物监测。在监测过程中,有6个锅次的 工艺监测、化学监测达到规定要求,而生物监测结 果却为阳性。生物监测是通过标准化的菌株和合 乎要求的抗力来考核整个负荷是否达到灭菌合格 的要求,是灭菌效能测定的直接而可靠的方法及 指标[1-2]。监测结果评价时,任何生物指示剂呈 阳性结果,均应认为灭菌失败。为此,作者对灭菌 的每一个环节仔细分析,查找存在的原因,最终发 现,是因嗜热脂肪杆菌芽胞污染了电热恒温水温 箱内的水,然后再进入有裂痕的灭菌后生物指示 剂试管内所致,造成了生物指示剂的假阳性结果。 经文献检索,未有相同报告,此现象虽不多见,但 不可忽视,现报告如下。
1 材料与方法
新添置的脉动真空矩型压力蒸汽灭菌器是由 江苏省张家港市华菱医疗设备制造有限公司生 产,型号为YXQ.MG-210。试运行监测时,每个 锅次均进行B-D试验、化学指示卡、指示胶带、 留点温度计200℃和生物指示剂测试。生物指示 剂为自含式嗜热脂肪杆菌芽胞生物指示剂,由中 国军事医学科学院微生物流行病研究所研制,北 京四环卫生药械厂有限公司出品的四环牌ME- 压力蒸汽灭菌生物指示剂,含菌量为5×105~5 ×106cfu/片,在121℃±0.5℃饱和蒸汽条件 下,存活时间≥3.9 min,杀灭时间≤19 min;指 示胶带、化学指示卡是压力蒸汽灭菌指示胶带、化 学指示卡,均为132℃指示(由3M公司提供);标 准试验包是用16条自制的全棉手术巾包扎成23 cm×23 cm×15 cm[2]; BD测试包为一次性B-D 测试包(由3M公司提供)。
生物监测方法:根据2006年江苏省颁布的 《消毒供应中心(室)建设管理规范》的要求,将2 个自含式嗜热脂肪杆菌芽胞生物指示剂置于标准 试验包中心部位,将标准试验包置于灭菌柜内排 气口上方[3],经过一个灭菌周期后,将生物指示 剂试管取出,在室温下放置10 min左右,将管内 安瓿夹碎,浸没菌片,充分摇匀,连同阳性对照管, 一起置于56℃电热恒温水温箱内, 48 h观察结 果。
生物监测的结果判断标准:若生物指示剂试 管内培养基不变色,且阳性对照管变黄色,表示灭 菌合格;若生物指示剂试管内培养基变黄色,同阳 性对照管的黄色一致,表示灭菌不合格。2支同 时灭菌的生物指示剂只要其中有一支阳性也视为 灭菌不合格。
2 测试结果
在整个测试过程中,工艺检测不合格3次,化 学检测不合格4次,生物检测不合格13次,3项 检测均合格3次(间断出现)。在生物监测不合格 的锅次中,发现其中有6个锅次,工艺检测与化学 检测结果均达到了灭菌规定的要求,但生物监测 结果仍然为阳性,在这6个锅次的12支生物指示 剂试管中,有6支在4h内出现阳性,有3支在48 h后出现阳性,另有3支为阴性,即在同一锅次的 2支试管中一支为阴性,另一支则为阳性,共有3 次。
3 原因分析
在正常情况下,如果工艺检测与化学检测符 合灭菌规定的要求,生物检测就能达到灭菌效果, 出现上述这样的阳性结果,尚不多见。生物指示 剂出现阳性的情况受诸多因素的影响,分析如下。
3.1 排除灭菌设备及操作问题
灭菌设备的质量和故障、蒸汽质量、残留冷空 气、物品包装以及摆放不当、在使用中不按照使用 说明操作,违背无菌操作原则等均可导致灭菌失 败。然而在上述6个锅次中,从整个灭菌过程到 包外指示胶带、包内指示胶带卡、留点温度和B- D试验结果,经认真排查与测试,排除了这些问题 的存在。自含式嗜热脂肪杆菌芽胞生物指示剂的 设置与结构本身,能避免被污染,使用时菌片进入 培养基不与外界接触,均在试管内操作就能完成 因此操作中的污染也不存在。
3.2 排除放生物指示剂的标准试验包不符合 要求
在大小符合规定要求的情况下,当标准测试 包布不能做到使用1次,及时清洗1次时,也可使 生物监测结果阳性。这是因为测试包巾不及时清 洗或不按要求正规清洗,布巾经多次使用后,布纤 维受高温蒸汽作用,经纬线密度发生变化,相互紧 压,填塞了原有的孔隙,使其密度增强,蒸汽不易 穿透,影响监测效果[4];此情况开始未予重视,但 在每灭菌1次,包巾均彻底清洗1次,且工艺检测 与化学检测符合灭菌规定要求,仍然出现生物监 测阳性,这说明,此阳性与标准试验包的因素也无 关。
3.3 排除生物指示剂的质量问题
镇江市疾病控制中心和该市的绝大部分医疗 单位均使用同样的生物指示剂,均未发现问题。 测试期间还特请市疾病控制中心来帮助监测 次,结果各项监测包括生物监测均符合要求。因 此,此阳性也可排除生物指示剂本身的影响因素。
3.4 生物指示剂的假阳性结果是因电热恒温水 箱的水被污染所致
逐一排查每一个环节后发现,使用自含式生 物指示剂时,在夹碎管内安瓿的过程中,外层试管 会出现裂痕,对生物监测的阳性结果有影响。为 此做了3项专门实验。①专取生物指示剂的培 养基放入2支清洁塑料试管内,经高压灭菌, 1支 试管内加电热恒温水箱的水2 mL,另1支加5 ℃的水2 mL(自来水加热而成)作对照,放56℃ 培养箱, 48 h后观察结果,发现含水箱水的试管 出现阳性,而另1支对照管为阴性。②在含水箱 水的阳性试管与自含式生物指示剂阳性对照管 内,各取1 mL液体,严格按无菌操作置于血培养 基中,放在37℃电热恒温培养箱进行培养,经48 h后,观察到2只平皿均发现有芽胞杆菌式菌落 生长,经涂片染色,镜下观察均为革兰阳性芽胞杆 菌。③将2支经灭菌后用血管钳钳夹过的空塑 料试管(有与生物指示剂试管模拟裂痕),放入56 ℃电热恒温水温箱中, 48 h后观察,发现2支试 管均有水渗入,但量少均不足0.5 mL。以上3项 实验充分说明,电热恒温水温箱的水被嗜热脂肪 杆菌芽胞污染且在其内生存,水温箱的水渗入有 裂痕的生物指示剂试管,可造成生物指示剂的假 阳性结果。
因此可以断定,在用血管钳夹碎或者用手捏 碎自含式嗜热脂肪杆菌芽胞生物指示剂管内安瓿 时,可致外层试管出现裂痕,将其放56℃电热恒 温水温箱内培养后,可使阳性的生物指示剂(如阳 性对照管)内活的嗜热脂肪杆菌芽胞,通过裂痕渗 入水温箱的水中,并在其内生存。事后调查还得 知,此温箱内的水使用以来从没有更换过,也从未 消毒过,每次水少了仅是添加,嗜热脂肪杆菌芽胞 污染了水温箱内的水,当灭菌后的生物指示剂放 入水温箱时,如果试管有裂痕,水温箱中的水就会 渗入,嗜热脂肪杆菌芽胞随之也侵入到灭菌后的 生物指示剂试管内,出现了生物指示剂的假阳性 结果。由于裂痕大小不一,污水渗入速度快慢不 一,快的在48 h内出现阳性结果,慢的在48 h后 才出现。而生物指示剂的真阳性在48 h内出现, 一般不会在48 h后。在钳夹试管时,并不是每一 次都有裂痕,但只要有裂痕,就可能出现阳性;如 没有裂痕,嗜热脂肪杆菌芽胞就无法侵入,也就会 出现阴性结果。因此在同一个锅次的同一个部位 的两个试管,也就出现了一个阳性一个阴性的结 果。当将水温箱中的水更换,并将每一个生物指 示剂试管外包一层防水塑料再放入水温箱内培养 时,灭菌后的生物指示剂就未再出现类似的阳性 结果。
参考文献
[1] 何曙云,邵珍红,刘宇英,等.生物指示剂的实验评价[J]. 中华医院感染学杂志, 2000, 3: 202.
2] 杨华明,易 滨.现代医院消毒学[M].北京:人民军医出 版社, 2002: 56.
3] 张镇静,霍孝蓉.消毒供应中心(室)建设管理规范[M]. 南京:东南大学出版社, 2006: 41.
4] 刘洪兰.脉动真空压力蒸汽灭菌器灭菌过程监测[J].中国 消毒学杂志, 2007, 24(1): 97.
来源：中国化学试剂网
