糖精是甜味剂,其学名为邻一磺酰苯甲酰亚胺,因糖精难溶于水,故食品生产中常用其钠盐,即糖精钠。糖精钠的分子式为C7H4O3NSNa·2H2O。糖精钠无营养价值。其致癌作用一直都有争议,考虑到人体安全性,加之糖精对人体无营养,规定婴幼儿食品、病人食品和大量食用主食都不得使用。M(C7H4O3NSNa·2H2O)=241.19。
高效液相色谱法
1.仪器
HPLC仪(具紫外检测器)。
2.试剂
①甲醇。
②0.02mol·L-1乙酸铵液:取1.54g乙酸铵,加水溶解并定容至1L,经0.45µm滤膜过滤。
③糖精钠标准贮存液(1mg·mL-1):称取经120oC烘烤4h的无水糖精钠0.0851g,用水溶解,并定容至100mL,经0.45µm滤膜过滤。
④糖精钠标准应用液(O.1mg·mL-1)。
⑤NH3·H2O(1+1)。
⑥0.08%NaOH液。
⑦HCl。
⑧0.2%CuSO4。
⑨4%NaOH液。
⑩无水乙醚。
3.仪器工作条件
①不锈钢色谱柱:250mm×4.6mm,内装粒径YWGC1810µm,或100mm×8mm,内装粒径RADIALPAKµBONDAPAKl0µm。
②流动相:甲醇+0.02mol/L乙酸铵(54-95)。
③紫外检测器(波长230nm)。.
④灵敏度0.2AUFS。
⑤流速1.2mL/min。
⑥进样量10µL。
4.标准曲线制备
分别吸取糖精钠标准应用液(O.1mg·mL-1)0.0mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL于10mL容量瓶中,用(1+1)氨水调pH≈7,用水定容至刻度,摇匀,分别取10pL注人HPLC仪,以峰面积为纵坐标、浓度为横坐标,绘制标准曲线。
5.检测步骤
①果汁、酒类:准确称取果汁类样液(10g)于烧杯中,用NH3·H2O(1+1)调pH=7,移入l0mL容量瓶中,用水定容至刻度,摇匀,转移此溶液于离心管中,离心,上清液过滤(0.45pm滤膜),取滤液10mg·mL-1L注入HPLC仪。
②固体、半固体食品:准确称取(25g)固体、半固体样于透析膜中,加0.08%NaOH60mL,调成糊状,将透析袋口扎紧,放于盛有0.08%NaOH200mL的烧杯中透析,过夜。在透析液烧杯中,加(1+1)HCl0.8mL,使呈中性,0.2%CuSO4液15mL、4%NaOH液8mL,混匀,30min后过滤。滤液100mL用水定容至250mL于分液漏斗中。加稀HCl(I+I),用无水乙醚30mL提取残渣2次,合并乙醚提取液于K-D浓缩器中,浓缩至干。加水溶解,用NH3·H2O(1+1)调PH≈7,移于10mL容量瓶中用水定容至刻度,用0.45µm滤膜过滤。取滤液10µL注入HPLC仪。
6.计算
食品中糖精钠含量(g/kg)=(Cs*1000)/[m(V2/V1)*1000]
式中Cs——样品峰面积查标准曲线对应含量,mg;
m——样品质量,g;
V1——样品液体积,mL;
V2——进样体积,mL。
7.说明
①样品如为碳酸饮料类,应先在水浴加温除CO2;如为配制酒类应,先在水浴加热除乙醇,再用氨水调pH。
②固体、半固体样品为蜜饯、糕点、酱菜、冷饮等。