笔者依据JJF1059-1999《测量不确定度评定与表示》、《化学分析中不确定度的评估指南》、《中国药典》2005年版二部，对紫外分光光度法测定盐酸洛贝林注射液含量的不确定度进行了分析，以期找出影响因素最大的分量，从而对检测进行优化。
一、实验部分
1.仪器与试剂
UV340紫外分光光度计，美国热电公司。供试品:盐酸洛贝林注射液，上海禾丰制药有限公司，规格1mL:3mg，批号080702。
2.测定方法
供试品溶液的制备:精密量取供试品溶液2mL置100mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取15mL置100mL量瓶中，加水稀释至刻度，制成每1mL中约含10μg的溶液，摇匀即得。
取供试品溶液，置于厚度为1cm的石英吸收池中，用UV340紫外分光光度计测定其在249nm的波长处的吸光度，其平均值为0.346，按盐酸洛贝林(C22H27NO2·HCl)的吸收系数(
)为375计算，得盐酸洛贝林注射液的含量为标示量的102.5%。
二、不确定度评估
1.数学模型
盐酸洛贝林注射液中含盐酸洛贝林(C22H27NO2·HCl)的标示百分含量为
式中:W——盐酸洛贝林注射液的标示百分含量，%；A——供试品溶液的吸光度；
——盐酸洛贝林的吸收系数；L——液层厚度，cm；C标——盐酸洛贝林注射液的标示浓度，mg·mL-1；
——供试品溶液的稀释体积
，V；1000——从g到mg的换算系数；100——从100mL到mL的换算系数。
2.不确定度来源
(1)
是《中国药典》规定的吸收系数，是该物质的物理常数，为给定值，本次测量暂不考虑其不确定度。
(2)L亦即测量过程中使用的吸收池的厚度(1cm)，吸收池为供应商提供的合格产品，一般认为其质量符合规定。并且每次测量之前均对配对使用的吸收池进行校准，测量过程中均使用参比光路，故在此未考虑其不确定度。
(3)标示浓度C标即其规格(1mL:3mg)，为盐酸洛贝林注射液含量的名义浓度，其有效位数可视为无限多位，没有欠准数字，不产生不确定度。
(4)吸光度A引起的不确定度u(A)
①测量重复性引起的不确定度u(A1)
对10份供试品溶液进行紫外分光光度法测定，每份测定3次，得到30个吸光度数据，其平均值为0.346，是随机测量，属A类评定，计算各次实验的标准偏差s，则
u(A1)=1.39×10-3
②紫外分光光度计读数准确度的不确定度u(A2)
由UV340紫外分光光度计的检定证书可知:测量结果的准确度的相对偏差为0.39%，其引用的不确定度假定为矩形分布(
)，则其标准不确定度为
③紫外分光光度计测量稳定性的不确定度u(A3)
由UV340紫外分光光度计的检定证书可知:测量结果的稳定性为0.06%，其引用的不确定度假定为矩形分布(
)，则其标准不确定度为
由以上3种分量合成得吸光度A的标准不确定度为
吸光度A的相对标准不确定度为
urel(A)=u(A)/A=2.67×10-3/0.346=7.72×10-3
(5)供试品溶液稀释引起的不确定度u(V)
①2mL单标线吸管的不确定度u(V1)
2mL单标线吸管经检定为A级，容量允差为±0.010mL，设为三角形分布(
)，属B类评定，则
urel(V1)=u(V1)/V1=4.08×10-3/2=2.04×10-3
②15mL单标线吸管的不确定度u(V2)
15mL单标线吸管经检定为A级，容量允差为 ±0.025mL，设为三角形分布(
)，属B类评定，则
urel(V2)=u(V2)/V2=0.0102/15=6.80×10-4
③100mL单标线容量瓶的不确定度u(V3)、u(V4)
a.校准:100mL容量瓶经检定为A级，20℃时的体积为(100±0.10)mL，容量允差为±0.10mL，设为三角形分布(
)，属B类评定，则
b.重复性:100mL容量瓶充满10次并称重，得出标准偏差为0.02mL，可以直接用作标准不确定度。
u2=s=0.02mL
c.温度:该容量瓶已在20℃时校准，而实验室温度在±5℃之间变动。水的体积膨胀系数为2.1×10-4℃-1，由此产生的体积变化为±(100×5×2.1×10-4)=±0.105mL，假设温度变化是矩形分布(
)，属B类评定，则
三种分量合成得到容量瓶体积的标准不确定度为
urel(V3)=u(V3)/V3=urel(V4)=u(V4)/V4=0.0757/100=7.57×10-4
3.不确定度分量汇总
通过以上量化分析，得出表1。
<CTSM>表1数值和不确定度</CTSM>
4.合成标准不确定度
uc(w)=W×
5.扩展不确定度
假定测量结果符合正态分布，当置信概率为95%时，选择包含因子k=2，则扩展不确定度为
U(w)=k×uc(w)=2×0.83%=1.7%
6.不确定度报告
紫外分光光度法测定盐酸洛贝林注射液的含量，含盐酸洛贝林(C22H27NO2·HCl)为标示量的102.5%±1.7%，k=2。
三、讨论
根据小分量不确定度不足最大分量不确定度的1/3时，小分量不确定度可以忽略不计的原则，由表1的评定结果可以看出，吸光度A引起的不确定度分量对含量测定的影响最大，而其他因素对合成不确定度的贡献均不显著。吸光度A引起的不确定度是由多个分量叠加得到的，而单个分量的大小由上述分析可以看出，主要取决于吸光度的测量重复性以及紫外分光光度计读数准确度的不确定度。因此，在用本方法进行盐酸洛贝林注射液含量测定时，可通过规范实验操作、定期对紫外分光光度计进行检定及期间核查等途径，降低不确定度值的大小。
在稀释供试品溶液时所用的容量器具均为A级量器，故已不能通过提高量器的精密度改善结果，但可以通过重新设计实验步骤，尽可能减少稀释转移的次数，减少urel(Vi)分量的个数，减少叠加对结果的影响。另外，由表1可以看出，2mL单标线吸管引起的不确定度分量较其他体积分量大得多，故应尽量避免使用2mL及2mL以下体积的量器，以降低测量不确定度，提高测定结果的可靠性。
在药品检验过程中，可先对其检验方法的不确定度进行评估，找出影响因素较大的分量，以便在检验中充分注意，采取适当途径，降低不确定度，提高药品检验质量。
