1.血清铁和总铁结合力测定铁是人体必需的微量元素。70kg的人体内含铁化合物中铁的总量约为3270mg,占体重的0.047‰。血清中的铁以形式与运铁蛋白结合。所以在测定血清铁含量时,需首先使Fe。’与运铁蛋白分离。血清铁的测定尚缺少权威性方法。原子吸收法仪器设备复杂,费用昂贵,且没有分光光度法可靠性好,很少在实验室中用来做血清铁的常规分析。比色法仍然是测定血清铁的主要方法。
【检测方法】亚铁嗪比色法测定血清铁和总铁结合力。血清中的铁与运铁蛋白结合成复合物,在酸性介质中铁从复合物中解离出来,被还原剂还原成二价铁,再与亚铁嗪直接作用生成紫红色复合物,与同样处理的铁标准液比较,即可求得血清铁含量。总铁结合力(total iron binding capac时,TIBC)是指血清中运铁蛋白能与铁结合的总量。将过量铁标准液加到血清中,使之与未带铁的运铁蛋白结合,多余的铁被轻质碳酸镁粉吸附除去,然后测定血清中的总铁含量,即为总铁结合力。
【参考区间】血清铁:成年男性1l~30umol/L(600~1700ug/L);成年女性9~27umol/L(500~1500ug/L)。血清总铁结合力:成年男性50~77umol/L,(2800~4300~ug/L)成年女性54~77gmol/L(3000~4300~tg/L)。
【评价】 线性:在140umol/L以下线性良好,符合Beer定律。批内精密度(n=20),测定范围18.45~19.2umol/L, 17.92pmol/L,S:0.3lmol/L,Cv:3.01%。血清TIBC, :61.51umol/L,,S:2.15umol/L,CV:3.5%。批间CV:2.56%回收试验:回收率98.3%~100.56%。干扰试验:Hb>250mg/L,时结果偏高1%~5%。胆红素102.6~171gmol/L时结果升高1.9%~2.8%。甘油三酯5.65umol/L时结果升高5.6%。铜31.4umol/L时结果升高0.33gmol/L,在生理条件下铜与铜蓝蛋白结合,故对铁的测定基本上无干扰。
2.血清锌测定锌是人体主要的微量元素之一,成人体内含锌2~3g。血清锌的主要测定方法有原子吸收分光光度法、中子活化法和吡啶偶氮酚比色法。下面介绍吡啶偶氮酚比色法测定血清锌。
【检测方法】吡啶偶氮酚比色法测定血清锌。血清中的高价铁及铜离子被维生素C还原成低价,两者均能同氰化物生成复合物而掩蔽。锌也和氰化物结合,但水合氯醛能选择性地释放锌,使锌与2-[(5-溴-2一吡啶)-偶氮]一5-二乙基氨基苯酚(5-B-PADAP)反应生成红色复合物,与同样处理的标准品比较,求得血清锌含量。
【参考区间】成人血清锌9.0~20.7umol/[(590~1350ug/L)。
【评价】批内CV 3.05%~3.08%,批间CV 2.97%~3.12%。
3.血清铜测定铜是人体必需微量元素之一,正常人体内含铜80~100mg,其中95%的铜与肝脏生成的%一球蛋白结合,形成铜蓝蛋白,铜蓝蛋白是运输铜的基本载体。临床血清铜的测定方法主要有原子吸收分光光度法和比色法。
【检测方法】用双环己酮草酰二腙比色法测定血清铜。加稀盐酸于血清中,使血清中与-蛋白质结合的铜游离出来,再用三氯醋酸沉淀蛋白质,滤液中的铜离子与双环己酮草酰二腙反应,生成稳定的蓝色化合物,与同样处理的标准液比较,即可求得血清铜含量。
【参考区间】成年男性1 0.99~2 1.98umol/L(700~1400ug/L);成年女性1 2.56~23.55umol/L,(800~1500ug/L)。
【评价】本法线性范围可达62.8umol/[。。双环己酮草酰二腙与铜反应生成的有色络合物,在水溶液中的摩尔吸光系数为16000L/(mol·cm)。本法显色稳定,显色后在4~20℃可稳定1小时,特异性高。
4.血清铅测定 目前用于测定血铅含量的方法主要有:石墨炉原子吸收法、等离子发
射光谱法、阳极溶出伏安法、火焰原子吸收光谱法等。
【检测方法】石墨炉原子吸收光谱法测定血清铅。血样用Triton X-100作基体改进剂,溶血后用硝酸处理,用石墨炉原子吸收光谱法在283.3nm处测定铅的含量。
【参考区间】成人血铅<100gg/L。
【评价】最低检测浓度为3mg/L,回收率为95.1%~103.2%,精密度CV:3.7%~5.0%。血中3倍治疗量的EDTA及3倍于正常值的NaCl、 对测定无影响。在测定过程中,灰化温度、干燥和时间的选择很重要,要防止样品飞溅,因石墨管的阻值不同,更换石墨管道的阻值作校正曲线。