一、活性要求及测定方法
1.酶活性测定
1.1淀粉酶活性侧定
淀粉为底物,以Nelson/Somogyi还原糖测试淀粉酶活性(U/mL);10000+1000(1个酶活力单位定义为:40℃,pH6.5时,每分钟释放1μmol还原糖所需要的酶量)。
以对硝基苯基麦芽糖为底物测试淀粉酶活性(Ceralpha)(U/mL):3000+300(1个酶活力单位定义为:40℃,pH6.5时,每分钟释放1μmol对硝基苯基所需要的酶量)。
1.2蛋白酶活性测定
酪蛋白测试蛋白酶活性:300一400U/mL[1个酶活力单位定义为:40℃,pH8.0时,每分钟从可溶性酪蛋白中水解出(并溶于三氯乙酸)1μmol酪氨酸所需要的酶量];或7一15U/mg[1个酶活力单位定义为:37℃,pH7.5时,每分钟从酪蛋白中水解得到一定量的酪氨酸(相当于1.0pmol酪氨酸在显色反应中所引起的颜色变化,显色用Folin一Ciocalteau试剂)时所需要的酶量]。
偶氮一酪蛋白测试蛋白酶活性(U/mL);300一400[l内肽酶活力单位定义为:40℃,pH8.0时,每分钟从可溶性酪蛋白中水解出(并溶于三氯乙酸)1μmol酪氨酸所需要的酶量]。
1.3淀粉葡萄糖苷酶活性侧定
淀粉/葡萄糖氧化酶一过氧化物酶法测试淀粉葡萄糖苷酶活性(U/mL);2000一3300[l个酶活力单位定义为:40℃,pH4.5时,每分钟释放1μmol葡萄糖所需要的酶量]。
对一硝基苯基一麦芽糖苷(PNPBM)法测试淀粉葡萄糖昔酶活性(U/mL):130一200[l个酶活力单位定义(1PNP单位)为:40℃时,有过量的1β-葡萄糖苷酶存在下,每分钟从对一硝基苯基-β一麦芽糖苷释放1μmol对一硝基苯基所需要的酶量]。
2.干扰酶
市售热稳定a一淀粉酶、蛋白酶一般不易受到其他酶的干扰,蛋白酶制备时可能会混入极低含量的β一葡聚糖酶,但不会影响总膳食纤维测定。本法中淀粉葡萄糖普酶易受污染,是活性易受干扰的酶。淀粉葡萄糖普酶的主要污染物为内纤维素酶,能够导致燕麦或大麦中β一葡聚糖内部混合键解聚。淀粉葡萄糖苷酶是否受内纤维素酶的污染很容易检测。
二、判定标准
当酶的生产批次改变或最长使用间隔超过6个月时,应按下表所列标准物进行校准,以确保所使用的酶达到预期的活性,不受其他酶的干扰。