建立了肉制食品中5种邻苯二甲酸酯类增塑剂(PAEs)含量的检测方法。样品用正己烷提取,C18柱分离,柱温35·0℃,乙腈-水为流动相梯度洗脱,流速1·0mL/min,紫外检测波长226nm。5种PAEs分离特异性好,在0·02~10μg/mL之间均具有较好的线性关系,检出限在4·4~13·8ng/mL之间,高、中、低3水平的回收率均在79·5%~102·0%之间,相对标准偏差均在1·1%~14%之间。方法适用于肉制食品中邻苯二甲酸酯类的检测。
关键词:邻苯二甲酸酯;高效液相色谱;肉制食品
食品容器和包装材料增塑剂包括邻苯二甲酸酯类(PAEs)、己二酸酯类(AEs)等。增塑剂与塑料间并没有严密的化学结合键,故很容易进入环境。近年的研究表明:PAEs和AEs在体内长期累积,可致畸、致癌和致突变[1,2]。因此,增塑剂的分析检测受到重视,尤以PAEs为研究对象居多。目前,PAEs的检测技术主要采用薄层色谱法[3]、气相色谱法[4~6]、液相色谱法[7~14]、气-质联用法[15,16],样品处理技术主要有液-液萃取[3,8,14,15]、固相萃取[4,5,9,11,16]以及固相微萃取[6,7,12,15]等,涉及的基体主要为PVC塑料[3,4,6,15]、环境样品(如水、泥土)[5,8,13,16]、组织和血浆[7,8,10,15]、食品[12,14]等。食品因直接被摄入而危害更大,报道过的研究对象主要包括:水产品、牛奶、食用油等。肉制食品的脂肪含量高,PAEs在其中的溶出程度尤为严重,但至今未见相关检测方法报道。
本文以邻苯二甲酸二乙酯(DEP)、邻苯二甲酸正二丁酯(DBP)、邻苯二甲酸正二辛酯(DOP)、邻苯二甲酸丁基苄基酯(BBP)、邻苯二甲酸(2-乙基己基)酯(DEHP)等5种PAEs为研究对象,建立了高效液相色谱法测定肉制食品中PAEs的方法。方法重现性好,准确度高,可用于肉制食品中此类物质的测定,也可用于生产企业的质量控制。
1实验部分
1.1仪器与试剂
戴安P680C高效液相色谱仪,包括:P680型四元梯度泵,TCC-100型柱温箱,ASI-100型自动进样器,UVD170U型紫外检测器,Chromeleon色谱工作站;AB104-N型电子天平;XHF-D型高速分散器;SK-1型涡旋混匀器;DS180A型超声波清洗机;HeraeusPrimoR高速冷冻离心机;D10-12型氮气吹扫仪;HealForcePW超纯水系统。DEP、DBP、DEHP、DOP标准品(Sigma-Aldrich),BBP标准品(TCI),乙腈(HPLC级)、正己烷(Fisher),水为超纯水。
1.2色谱条件
色谱柱:PhenomenexLunaC18柱(250mm×4.6mmi.d.,5μm);预柱:PhenomenexC18柱(4mm×3mm,5μm);紫外检测波长:226nm;柱温:35·0℃;进样体积20μL;流动相:乙腈-水;流速:1·0mL/min;梯度洗脱。
1.3标准溶液配制
分别称取DEP、BBP、DBP、DEHP、DOP标准品各0·0500g,分别用乙腈定容于50mL容量瓶中,配成1mg/mL的5种PAEs的储备液。准确移取5种PAEs的储备液各100·0μL,置于同一10mL容量瓶中,用V(乙腈)∶V(水)=75∶25的混合溶液定容,配成10·0μg/mL的混合标准应用溶液。再用水逐级稀释,配成2·0、1·0、0·20、0·10、0·020、0·010μg/mL的混合标准应用溶液。
1.4样品处理
准确称取已切碎的火腿肠0.5g于试管中,加入正己烷2mL,匀浆,涡旋振摇3min,超声提取15min,在-10℃下10000r/min离心10min,取清液;同法再萃取1次,合并2次清液,45℃下氮气流吹干,用乙腈0.5mL溶解残渣,经0.45μm微孔滤膜过滤后,进样。以生产日期不超过15天,距离表面1cm以上的内层肉制品作为空白。
2结果与讨论
2.1色谱条件的选择
PAEs在205、226和272nm处有3个特征吸收峰,吸收强度依次增大,但272nm处杂峰干扰较多,综合考虑吸收强度及干扰因素,选择226nm作为检测波长。
以纯乙腈作为流动相时,BBP和DBP、DEHP和DOP两两未能达到完全分离,增加流动相中水的含量,5种PAEs能完全分离,但DEHP和DOP的出峰时间增长,当以V(乙腈)∶V(水)=75∶25的流动相等度洗脱时,DOP的出峰时间超过了50min,故考虑采用梯度洗脱。在如表1所示条件下5种PAEs完全分离,出峰时间控制在22min之内。
2.2样品处理条件的选择
肉制食品所含成分复杂,目前主要采用有机溶剂液相萃取。尝试采用乙腈、乙醇、乙酸乙酯、正己烷等溶剂,正己烷效果最好。因肉制食品含有大量油脂,在萃取PAEs过程中油脂易被正己烷同时提取,对样品测试产生干扰。考虑DEP、BBP、DBP、DEHP、DOP的凝固点分别为:-40℃、-35℃、-35℃、-55℃、-25℃,而大部分油脂尤其是肉制食品中的主要油脂动物脂肪,在-8℃以上即发生凝固,故在-10℃下高速冷冻离心,可除去大部分油脂,减少干扰[14]。
摘自：中国分析仪器网
