【实验原理】
17-酮类固醇(17-ketosteroids，17-KS)是肾上腺皮质激素及雄性激素的代谢产物，它们都是环戊烷多氢菲的衍生物，在第17位碳原子上都有一酮基。这类化合物主要为雄酮、表雄酮、去氢表雄酮和原胆烷醇酮等，大部分结合成为水溶性的葡萄糖醛酸酯或硫酸酯。17-KS必须经过酸水解成游离的类固醇后，再用有机溶剂提取，经过洗涤除去酸类与酚类物质，利用17-KS分子结构中酮-亚甲基(一CO—CH2一)能在碱性溶液中与问二硝基苯作用生成紫红色化合物(Zimmermann反应)，在520nm波长处有一吸收峰，可与标准液同时操作进行比色测定。
【试剂与器材】
1．浓盐酸(AR)
2．乙醚(AR)
3．去醛乙醇无水乙醇1000ml，加入4g盐酸问苯二胺，充分混匀后，暗处静置1周，每天振摇2次，到期进行蒸馏，弃去开始馏出与最后剩余部分各50ml，收集中间部分所得乙醇，置棕色瓶中保存。
4．0．12mol/L间二硝基苯乙醇溶液称取纯化的间二硝基苯2g，溶于去醛无水乙醇内，定容至100ml。冰箱避光保存。
间二硝基苯必须重结晶提纯，处理方法如下：取间二硝基苯20g，加95%乙醇150ml，加温至40℃，使其溶解。加2mol／L NaOH溶液100ml，静置5分钟。在室温下徐徐加蒸馏水2500ml，边加边摇，静置即可出现针状白色结晶，用布氏漏斗收集沉淀，并用蒸馏水洗涤后吸干，沉淀用无水乙醇80～120ml再结晶2次，纯化的结晶洁白无色，熔点90．5～9l℃。
5．100μg／ml雄酮标准溶液将雄酮(GR)置于干燥器中至少48小时，精确称取雄酮10mg，置于100ml容量瓶中，用去醛乙醇溶解并定容。此液不能久存，必须分装于洁净的中号试管中，每管0．2ml(含20μg)，置37℃温箱中烘干，置暗处保存，每次测定时取出一管使用。
6．5mol／LKOH溶液
7．70％去醛乙醇溶液取去醛乙醇70ml，加蒸馏水至100ml。
8．2mol／L NaOH溶液
9．仪器分光光度计。
【操作步骤】
1．标本收集 收集24小时尿液于洁净的容器中，预加浓盐酸5ml防腐，并记录尿液总量。
2．水解 取24小时混合尿液5ml，置试管中，加浓盐酸1．5ml，在沸水中煮沸20分钟，取出，置冷水中冷却。
3．提取 将上述水解液倒入30m1分液漏斗中，加乙醚约10ml，振摇2分钟，静置分层以后，弃下层尿液，加5ml 2mol／L NaOH于分液漏斗中，振摇1分钟，以除去酸性酚类干扰物质，静置分层后，弃去下层NaOH液，再加蒸馏水5ml洗涤2次，弃去下层水液，于40～45℃水浴中蒸干。此管即为测定管。
4．标准管 取上述分装于15mm×150mm试管中烘干的标准管一支作标准管。
5．显色 取测定管、标准管、空白管3支试管
各管混匀，1000r／min离心5分钟，上层液移入比色杯中，在波长520nm处，以空白管调零，读取各管的吸光度。
